Was wird für eine erfolgreiche DNA Sequenzierung benötigt?
Der erfolgreiche Einbau eines Nukleotids wird durch ein ausgeklügeltes Enzymsystem unter Beteiligung einer Luziferase in einen Lichtblitz umgesetzt und von einem Detektor erfasst. Die zu sequenzierende DNA dient als Matrizenstrang und liegt einzelsträngig vor.
Warum sind Primer radioaktiv markiert?
Es kommt an dieser Stelle im neusynthetisierten Strang zu einem Kettenabbruch. In der Folge entstehen DNA-Fragmente unterschiedlicher Länge, die in jedem separaten Ansatz stets mit dem gleichen ddNTP enden. Entweder der Primer oder die ddNTPs sind radioaktiv markiert.
Wie kommt die DNA Sequenzierung zum Einsatz?
Zudem kommt die DNA Sequenzierung in der Phylogenetik zum Einsatz. Das bedeutet, dass sich die Forscher mit der Abstammung von Lebewesen und deren Verwandtschaftsbeziehungen beschäftigen. Die aus der Sequenzierung gewonnenen Daten werden dann zur Erstellung von Stammbäumen verwendet.
Wie lange dauert eine DNA-Sequenzierung?
Mit der zunehmenden Bedeutung der DNA-Sequenzierung in der Forschung und Diagnostik wurden Methoden entwickelt, die einen erhöhten Durchsatz erlauben. Damit ist es nun möglich, das komplette menschliche Genom in etwa 8 Tagen zu sequenzieren .
Was sind die klassischen Verfahren zur Sequenzierung?
Beginnen wir mit den klassischen Verfahren zur Sequenzierung, die beide unabhängig voneinander und fast zeitgleich (1975 und 1977) entwickelt wurden: die Methode von Maxam und Gilbert und die Sanger Sequenzierung . Das Grundprinzip der Maxam-Gilbert-Methode ist es, eine chemische Spaltung der zu untersuchenden DNA zu veranlassen.
Was ist eine sequenzierende Sequenzierung?
Diese Sequenzierungstechnologie ist als Sequenzierung mit Brückensynthese von Solexa / Illumina bekannt. Die zu sequenzierende doppelsträngige DNA wird an beiden Enden mit einer unterschiedlichen Adaptersequenz an jedem Ende ligiert. Die DNA wird dann denaturiert und nach Verdünnung in einzelsträngiger Form auf eine Trägerplatte ligiert.