Warum sind hitzebeständige Polymerasen bei der PCR notwendig?
Die hohen Temperaturen sorgen dafür, dass sich die Wasserstoffbrückenbindungen zwischen den DNA Doppelsträngen trennen. Das bezeichnest du als Denaturierung. Wir erhalten nun aus einem DNA Doppelstrang zwei DNA Einzelstränge, die als Vorlage für ihre Vervielfältigung dienen.
Warum sind Taq Polymerase so wichtig?
Die Taq-Polymerase (kurz Taq) ist die DNA-Polymerase des Bakteriums Thermus aquaticus, dem sie ihren Namen verdankt. Sie ist außerordentlich hitzebeständig, da das Bakterium in Geysiren bei etwa 70 °C lebt. Das Enzym wird hauptsächlich zur DNA-Vervielfältigung mit Hilfe der Polymerase-Kettenreaktion eingesetzt.
Warum verschiedene Temperaturen bei PCR?
Wenn ein Versuch entwickelt wird, werden bei Problemen bei der PCR andere Temperaturen ausgetestet. Die Denaturierung und die Polymerisation haben einen Spielraum von 94-96°C bzw. 70-74°C, in dessen Bereich diese Schritte recht sicher ablaufen. Eine zu kurze Dauer kann aber problematisch werden.
Was benötigt PCR?
Eine PCR benötigt mehrere grundlegende Komponenten. Diese sind: Die Original-DNA, die den zu vervielfältigenden Abschnitt enthält (Template) Desoxyribonukleosidtriphosphate, die Bausteine für den von der DNA-Polymerase synthetisierten DNA-Strang.
Warum darf das 5 Ende eines Primers nicht komplementär zu seinem 3 Ende sein?
In den Primern sollten, wenn möglich, alle vier Basen in etwa gleich häufig vorhanden sein. Die Sequenzen der Primerpaare an den 3`-Enden sollten weder intra- noch intermolekular komplementär sein, damit die Primer nicht mit sich selbst hybridisieren können.
Was sind die PCR-Tests?
PCR-Tests sind die sicherste Methode, um eine Infektion mit dem Corona-Virus SARS-CoV-2 festzustellen. Bei der RT-PCR-Testung wird das Erbmaterial der vorhandenen Viren so stark vervielfältigt, dass es auch bei geringer Virenlast nachgewiesen werden kann.
Wie kann man die PCR einsetzen?
Man kann die PCR einfach auch analytisch einsetzen. Man schaut ob sie funktioniert oder nicht. Dazu macht man nach der PCR eien Elektrophorese und fotografiert die Fluoreszenz der DNA. Ob das richtige Produkt amplifiziert wurde, kann man anhand de Größe überprüfen.
Was brachte die Verbesserung der PCR-Technologie?
Eine entscheidende Verbesserung der PCR-Technologie brachte die Verwendung von thermostabilen DNA-Polymerasen, d. h. Enzymen, die auch bei Temperaturen von annähernd 100 °C ihre Polymerase-Aktivität behalten und nicht denaturieren.
Wie funktioniert ein PCR-Test im Labor?
Im Labor besteht ein PCR-Test aus zwei Schritten. In einem ersten wird das vorhandene Genmaterial mithilfe der Polymerasekettenreaktion (englisch: Polymerase Chain Reaction, kurz: PCR) vervielfältig. So können geringste Spuren von DNA untersucht werden. Das ist auch der Grund, warum PCR-Tests so empfindlich reagieren.