Was ist die Funktion einer Sequenzierung?
Das Grundprinzip der Sanger Sequenzierung liegt darin, mithilfe von Enzymen unterschiedlich lange DNA Abschnitte zu generieren, die sich jeweils um nur ein Basenpaar unterschieden. Anschließend können sie ihrer Länge nach analysiert werden. Über den Umweg können wir dann auf die Basenabfolge schließen.
Wie gibt man die Basensequenz an?
Übereinkunftsgemäß wird die Basensequenz vom 5′-Ende zum 3′-Ende des Stranges notiert, in der gleichen Richtung 5′→3′, in der die Polymerase die Nukleinsäure aus Nukleotiden synthetisiert.
Was ist eine DNA-Sequenzierung?
Die DNA-Sequenzierung ist ein molekularbiologisches Analyseverfahren, das die Nukleotidabfolge der DNA bestimmt und so der Entschlüsselung der Erbinformation (Genom oder Gene) von Organismen dient.
Was sind die klassischen Verfahren zur Sequenzierung?
Beginnen wir mit den klassischen Verfahren zur Sequenzierung, die beide unabhängig voneinander und fast zeitgleich (1975 und 1977) entwickelt wurden: die Methode von Maxam und Gilbert und die Sanger Sequenzierung . Das Grundprinzip der Maxam-Gilbert-Methode ist es, eine chemische Spaltung der zu untersuchenden DNA zu veranlassen.
Was ist eine sequenzierende Sequenzierung?
Diese Sequenzierungstechnologie ist als Sequenzierung mit Brückensynthese von Solexa / Illumina bekannt. Die zu sequenzierende doppelsträngige DNA wird an beiden Enden mit einer unterschiedlichen Adaptersequenz an jedem Ende ligiert. Die DNA wird dann denaturiert und nach Verdünnung in einzelsträngiger Form auf eine Trägerplatte ligiert.
Was sind die Herausforderungen der Genomsequenzierung?
Die Herausforderungen der Genomsequenzierung beschränken sich jedoch nicht nur auf das direkte Ablesen der Nukleinsäuresequenz. Aufgrund technischer Einschränkungen werden in jeder einzelnen Sequenzierungsreaktion nur kurze DNA-Schnitte (Reads) bis zu 1000 Basenpaare gelesen.