Was ist eine Vntr Region?
Je nachdem, wie lang solch eine Einheit ist, nennt man diese Abschnitte VNTR-Regionen (Variable Number of Tandem Repeats) mit 10-150 Basenpaaren pro Einheit oder STR-Regionen (Short Tandem Repeats) mit nur maximal 7 Basenpaaren pro Einheit.
Was sind VNTRs und wo liegen sie im menschlichen Genom?
Als Minisatelliten, Minisatelliten-DNA oder VNTRs (variable number tandem repeats) werden in der Genetik Abschnitte der DNA im Genom bezeichnet, die aus tandemartigen Wiederholungen einer kurzen (ca. 12–100 Nukleotiden langer) DNA-Sequenz bestehen.
Wo liegen VNTRs?
Daher gab ihnen Jeffrey die Bezeichnung VNTRs = variable number of tandem repeats. Die Wiederholungseinheiten (VNTRs) liegen an verschiedenen bekannten Stellen auf der DNA der Chromosomen.
Warum sind STRs besonders für den genetischen Fingerabdruck geeignet?
Wissenschaftler nennen sie Short Tandem Repeats (STRs), da sie aus DNS-Stücken bestehen, die sich ein paarmal hintereinander wiederholen. Wie oft sie das tun, ist für jeden Menschen charakteristisch. Und genau deshalb sind die STRs so gut für einen genetischen Fingerabdruck geeignet.
Welche Bestandteile enthält der Reaktionsansatz der PCR?
Grundsätzlich sind für eine PCR folgende Bestandteile notwendig:
- Ein doppelsträngiges DNA-Molekül (das so genannte Template, auch DNA-Matritze genannt).
- Zwei kurze, zur DNA-Matritze komplementäre Oligonucleotide (Primer), die an die DNA binden und die Startstelle für die DNA-Polymerase liefern.
Was enthält der mastermix?
Was ist ein PCR-Mastermix? Ein PCR-Mastermix ist eine fertig vorbereitete Mischung, die eine Polymerase, das zugehörige Puffersystem, MgCl2 und dNTPs enthält. Die Konzentration der einzelnen Reagenzien im Mastermix liegt 5- bis 10-fach über der jeweilig benötigten Endkonzentration im fertigen Ansatz.
Warum wird eine Kontroll PCR durchgeführt?
Als Kontrolle dient DNA aus dem nicht transformierten S. Weiterhin wird (wie bei jeder PCR) auch eine Nullkontrolle ohne DNA-Zugabe durchgeführt. Sie dient zur Kontrolle der verwendeten Lösungen auf DNA-Kontaminationen.
Welche maximale endkonzentration darf die DNS im PCR Ansatz nicht überschreiten?
Ideal sollten Konzentrationen zwischen 0,1 und 1,0 µM sein. Ausnahmen bestätigen die Regel.
Warum dürfen Primer nicht zu kurz sein?
Auch die Primer-Konzentration ist ein wichtiger Faktor: Wird der Primer in zu geringer Konzentration eingesetzt, gibt es nur wenig oder gar kein Reaktionsprodukt, während es bei einer zu hohen Primer-Konzentration zu unspezifischer Primer-Bindung (Fehlpriming) und einer Akkumulation unspezifischer Produkte kommen kann.
Was macht ein Primer PCR?
Primer werden auch für die PCR-Methode (Polymerase Kettenreaktion) benötigt, zum Beispiel wenn ein bestimmter gentechnisch veränderter Organismus oder eine bestimmte Gensequenz nachgewiesen werden soll. Der Primer ist eine Spiegelbildkopie eines charakteristischen Abschnitts aus der nachzuweisenden DNA-Sequenz.
Warum ist die Synthese von Primern notwendig?
Vor allem bei der Replikation ist ein Primer notwendig, da dieser den Beginn des DNA-Abschnitts festlegt, der vervielfältigt werden soll. Beim Menschen kann die DNA-Neusynthese durch die DNA-Polymerase nur an einem 3′-OH-Ende beginnen. Primer tragen so auch zur hohen Präzision der Replikation bei.
Warum 2 verschiedene Primer bei der Polymerasekettenreaktion?
Für die PCR werden zwei Primer benötigt. Die Primer bestimmen den Anfang und das Ende des amplifizierten DNA-Abschnittes. Durch die Bindung des Primer an den Einzelstrang entsteht am 5′-Ende ein doppelsträngiger Abschnitt. Die Taq-Polymerase erkennt diesen doppelsträngigen Abschnitt und bindet daran.
Warum dürfen die beiden Primer nicht komplementär zueinander sein?
Die Primer lagern sich dann auch an Bereiche an, die nicht ganz komplementär zu ihrer Sequenz sind. So kommt es zu einer Vermehrung von ungewünschten Artefakten, die auch das Endergebnis verfälschen.