Wie funktioniert Blotting?
Southern Blotting ist ein molekularbiologisches und biotechnologisches Verfahren, welches zur Analyse von DNA-Fragmenten benötigt wird. Dieses Verfahren ermöglicht so die Identifikation einer gesuchten DNA-Sequenz innerhalb der Erbsubstanz. Bei dieser Methode ist keine weitere Entschlüsselung notwendig.
Welchen Zweck dient die Elektrophorese beim Western Blot Verfahren?
Zur Auftrennung der Proteine kann man zwischen verschiedenen Elektrophorese-Arten wählen, je nachdem nach welchen Kriterien die Proteine getrennt werden sollen. Als Methoden bieten sich insbesondere SDS-PAGE, Nativ-PAGE und die isoelektrische Fokussierung an.
Warum macht man Western Blot?
Im Bereich der Medizin dient das Western Blotting dem Nachweis diagnostisch interessanter Proteine, so zum Beispiel von Antikörpern im Serum, welche für das Vorliegen bestimmter Infektionskrankheiten typisch sein können.
Was ist ein Blot?
Als Blotting oder Blotten bezeichnet man in der Molekularbiologie ein Verfahren zum Transfer von DNA, RNA oder Proteinen auf eine Membran. Der Name leitet sich aus dem englischen „to blot“ (klecksen, beflecken, mit Löschpapier abtupfen) ab, was auf die Vorgehensweise anspielt.
Wie funktioniert eine gensonde?
Gensonden sind Poly- oder Oligonukleotide (meistens einsträngige DNA, seltener RNA), die eine komplementäre Basensequenz zum gesuchten Gen aufweisen und sich an die passende DNA-Sequenz einer (immobilisierten) DNA anlagern können.
Wie funktioniert Fish?
Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung oder FISH wird in der Molekularbiologie eingesetzt, um DNA oder RNA in Zellen nachzuweisen. Dabei kommt eine markierte Sonde zum Einsatz. Diese wird künstlich erzeugt und besteht aus DNA oder RNA mit einer speziellen Basenabfolge (Sequenz).
Warum Blotting?
Die verschiedenen Blotting Techniken dienen der Untersuchung von DNA, RNA oder Proteinen. Ohne das Blotting, wäre eine Fixierung der Antigene und anderer Marker schwer auf einen Teststreifen umsetzbar. Auch im Nachweis bestimmter Erreger hat insbesondere das western Blotting eine große Relevanz in der Medizin.
Wie wertet man Western Blot aus?
Western Blot (Westernblot) bezeichnet die Übertragung (engl. Blotting) von Proteinen auf eine Trägermembran, die anschließend über immunologische Reaktionen nachgewiesen werden können. Die Übertragung kann auf unterschiedliche Weise durchgeführt werden: mittels Diffusion, Kapillarwirkung oder Elektrophorese.
Wie funktioniert Fluoreszenz in situ Hybridisierung?
Man verwendet Fluoreszenz-markierte DNA-Sonden, die komplementär zu einem gesuchten DNA-Abschnitt sind. Diese Sonden werden zu denaturierter DNA (durch Alkalisierung oder Hitze) hinzugegeben und können dann an den komplementären Abschnitt binden (Hybridisierung).